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DNA连接酶（T4 DNA Ligase）
产品简介
T4 DNA连接酶常用于催化双链DNA平末端或互补粘性末端之间的连接反应，也能催化双链RNA 5'-磷酸末端和3'-羟基末端间的连接。还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口。以上反应均需消耗ATP。
来源
重组蛋白质（E.coli）
活力单位定义
- 1个Weiss 活性单位是指在ATP-PPi交换反应中，37oC、20分钟内将1nmol [32PPi]转换为Norit可吸收形式所需的酶量。1个Weiss单位相当于约200个粘性末端连接单位(CEU)。
- 1个粘性末端连接单位：20μl反应体系(50mM Tris-HCl pH7.5，10mM MgCl2，10mM DTT，1mM ATP，25µg/ml BSA，0.12 µM(300ug/ml)的5'DNA 末端)中，在 16°C、30 分钟内50%连接HindIII 酶切的 Lambda DNA 产物所需要的酶量。
纯度
纯度 >95%，没有检测到其他蛋白酶和核酸酶活力。
应用
DNA平端、粘端连接或者DNA环化。
储存条件
冰袋运输；长期保存-20℃（12个月以上）；10 T4 DNA ligase Buffer 中含 ATP，为避免ATP的降解，建议解冻后的10 T4 DNA Ligase Buffer 分装成小包装并在-20℃保存。
溶液成分
| T4 DNA Ligase储存液 | 10 T4 DNA Ligase Buffer |
|---|---|
| 10 mM Tris-HCl，pH 7.5 | 400 mM Tris-HCl，pH 7.6 |
| 50 mM KCl | 100 mM MgCl |
| 0.1 mM EDTA | 100 mM DTT |
| 1 mM DTT | 5 mM ATP |
| 50%（V / V）Glycerin |
使用示例
以10μl连接体系示例，在微量离心管中加入以下各种成分：
| Linear vector DNA | 10-100ng |
|---|---|
| Insert DNA | 3:1 to 10:1 (molar ratio over vector) |
| 10 T4 DNA Ligase Buffer | 1μl |
| T4 DNA Ligase（10U/μL） | 0.2-1μl |
| ddH20 | UP to 10μl |
注意事项
- T4 DNA连接酶要求Mg2+，因此螯合Mg2+的EDTA的存在会阻碍反应；
- NaCl或KCl浓度大于200mM时强烈抑制T4 DNA Ligase；
- 65℃孵育10分钟或70℃孵育5分钟可以导致T4 DNA Ligase失活；
- 聚乙二醇(PEG) 极大地增加平末端连接效率。
产品规格
| 货号 | 规格 | 包装规格 | |
|---|---|---|---|
| T4 DNA Ligase | 10 buffer | ||
| MDL001-40 | 400 U | 40 μl | 200 μl |
| MDL001-200 | 2000 U | 200 μl | 1 ml |