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| Tb-3174 | 细胞核膜蛋白提取试剂盒 | 50 assays | 800 |
| Tb-3174A | 细胞核膜蛋白提取试剂盒 | 100 assays | 1,500 |
由于产品不断优化更新，请以实际收到的产品说明书为准！
一、描述：
本试剂盒提供的组份，采用特殊的非离子型去污剂，以及焦磷酸钠等数种蛋白磷酸酶和蛋白酶抑制试剂，
能够在非变性和低渗的条件下裂解细胞，经过洗涤去除大部分胞质蛋白和膜蛋白，释放的细胞核能够保持完整，再
用Lysis Buffer对细胞核蛋白质进行抽提的同时可以保持核蛋白质的活性，因此该产品可合适用于SDS-PAGE电泳、
Western Blot、免疫共沉淀，EMSA，Pull Down, 转录调控等后续蛋白质或分子生物学相关实验的研究，每次可以
从107
个培养细胞或200mg动物组织提取核蛋白质，本试剂盒可以使用 50 次。
二、产品特点：
1．提取的核蛋白质可以限度的保持蛋白质的活性，可以用于EMSA，转录因子分析的实验。
2．可以从 50107
个培养细胞或50200mg动物组织提取核蛋白。
3．整个实验过程只需要45分钟左右。
4．在提取的过程中，限度的减少了膜和胞质蛋白对核蛋白的污染。
5．不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。
三、试剂盒组份：能够使用 50次
Lysis Buffer 10mL
Hypotonic Buffer 50mL
磷酸酶抑制剂 300ul
PMSF 600ul
DTT 60ul
四、运输和保持条件：
常温下运输，在收到后，将磷酸酶抑制剂，PMSF 和 DTT 在-20 度的环境中保存，其余 2-8 度保存，保质期一年。
五、 操作步骤：
A 实体组织蛋白的提取
1． 在每1mL 冷Hypotonic Buffer加入 5 ul磷酸酶抑制剂, 10ul PMSF和1ul DTT 混匀。冰上保存数分钟待用。
2． 将100-200mg固体组织置于培养皿中，手术剪将小块充分剪碎，尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组
织，用PBS洗涤两次, 离心，取沉淀后加入0.6 mL冷 Hypotonic Buffer混匀，4℃下玻璃匀浆器上下手动
匀浆 30-50 次。或超声破碎细胞，每次30 S ，3～4次，每次间隔1 min， 置于冰上冷却。均质匀浆或超
声破碎细胞后应镜检，细胞破碎率不小于90％，同时没有明显的组织小块。
3． 转移到1.5mL预冷的离心管，手指弹管壁使沉淀悬起，冰浴10分钟，震荡10秒钟，混匀。
4．4℃ 3000rpm离心5分钟，立即弃上清，再加0.4mL冷 Hypotonic Buffer震荡洗涤沉淀30秒，再4℃ 5000rpm
离心5分钟。
5．再沉淀中加 0.2ml Lysis Buffer[每1mL Lysis Buffer 冷加入5 ul磷酸酶抑制剂, 10ul PMSF和1ul DTT）]
震荡将沉淀悬起，冰浴20分钟,再4℃15000rpm离心10 分钟，弃沉淀。上清为核提取物，分装后-70 ℃保
存。
注意：尽量不要吸取到沉淀，以免影响下游的某些实验。
B 培养细胞蛋白提取
1． 贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10mL/150mm培养板的冷PBS 洗两次，每次振摇数次以尽量去除培
养液。
2． 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中，1000rpm离心10 min，再
用10mL/150mm培养板的冷 PBS，1000rpm 5 min洗两次。
3． 在每 1mL 冷Hypotonic Buffer加入 5ul 磷酸酶抑制剂和10ul PMSF 和1ul DTT，混匀。冰上保存数分钟待
用。
4． 在上述培养板或离心管的细胞中，加入上述配制好的冷Hypotonic Buffer，加入量如下表所示：
细胞数量 培养板或培养瓶的规格 Hypotonic Buffer加入量
107
个 100mm培养板或150cm2
培养瓶 0.6-0.9ml
5×106
个 60mm培养板或75cm2
培养瓶 0.3-0.45ml
5．冷室或冰上操作，贴壁细胞用细胞刮子刮下，连Hypotonic Buffer一同转移至新的预冷的离心管中。悬浮培
养或裂解前刮下的贴壁细胞连Hypotonic Buffer一同转移至新的预冷的离心管中。
6．手指弹管壁使沉淀悬起，冰浴10分钟，震荡10秒钟，混匀。
7．以下步骤同实体组织蛋白的提取中的4-5步骤。
六、注意事项：
1． 所有接触样品的用具及试剂均需预冷。以免蛋白质的降解与失活。
2． 因为不同蛋白质和不同的实验，所需要的缓冲体系不同，提取后的蛋白质样品，如有必要，可透析除去
其它一些盐份。
3． 可以使用（BSP090 ）Sephadex 重力型脱盐柱脱盐或将缓冲液替换为实验所需要的目的蛋白质的合适缓冲
液。
4． 本试剂盒只提供磷酸酶抑制剂和PMSF蛋白酶抑制试剂，可以根据实验的需要在Lysis Buffer和Hypotonic
Buffer中加入一定浓度的其它蛋白酶抑制试剂，例如我公司生产的BS386，BS387 或PL009。
5． 对于提取的蛋白质可以采用我公司生产的改良型BCA 蛋白质浓度定量试剂盒（SK3051）或非干扰型蛋白
质浓度定量试剂盒（SK3071）或改良型Lowry法蛋白质浓度定量试剂盒（SK4041）对提取样品中的蛋
白质进行定量。
6． 如果用于蛋白质质谱研究，请用请用我公司生产的铜染（BSP017）或锌染（BSP019）或质谱用快速银染
试剂盒(BSP021)对胶上的蛋白质进行染色，这些染色方法对蛋白质没有修饰作用，所以对质谱图没有影
响。对于一般的染色，可以采用无毒型考马氏亮蓝染色液（SK3011）或高灵敏考马氏亮蓝染色液
（BSP041）来染色。
7． 使用后，请旋紧瓶盖，防止溶液挥发和与空气的物质发生化学反应。
8． 本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果，概不承担责
任。
| Tb-3166 | 冻存样本核蛋白提取试剂盒 | 50 assays | 600 |
| Tb-3166A | 冻存样本核蛋白提取试剂盒 | 100 assays | 1,000 |
| Tb-3167 | 植物核蛋白/细胞器蛋白提取试剂盒 | 50 assays | 600 |
| Tb-3167A | 植物核蛋白/细胞器蛋白提取试剂盒 | 100 assays | 1,000 |
| Tb-3168 | 酵母核蛋白提取试剂盒 | 50 assays | 600 |
| Tb-3168A | 酵母核蛋白提取试剂盒 | 100 assays | 1,000 |
| Tb-3169 | 植物核蛋白/胞质蛋白提取试剂盒 | 50 assays | 600 |
| Tb-3169A | 植物核蛋白/胞质蛋白提取试剂盒 | 100 assays | 1,000 |
| Tb-3170 | 藻类膜蛋白提取试剂盒 | 50 assays | 800 |
| Tb-3170A | 藻类膜蛋白提取试剂盒 | 100 assays | 1,500 |
| Tb-3171 | 线粒体蛋白提取试剂盒 | 50 assays | 600 |
| Tb-3171A | 线粒体蛋白提取试剂盒 | 100 assays | 1,000 |
| Tb-3172 | 植物线粒体蛋白提取试剂盒 | 50 assays | 600 |
| Tb-3172A | 植物线粒体蛋白提取试剂盒 | 100 assays | 1,000 |
| Tb-3173 | 植物线粒体膜蛋白提取试剂盒 | 50 assays | 800 |
| Tb-3173A | 植物线粒体膜蛋白提取试剂盒 | 100 assays | 1,500 |
| Tb-3174 | 细胞核膜蛋白提取试剂盒 | 50 assays | 800 |
| Tb-3174A | 细胞核膜蛋白提取试剂盒 | 100 assays | 1,500 |