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| Tb-3176 | 线粒体/胞浆蛋白提取试剂盒 | 50 assays | 600 |
| Tb-3176A | 线粒体/胞浆蛋白提取试剂盒 | 100 assays | 1,000 |
一、产品简介：
本试剂盒提供的组份可以提取动物细胞及组织中的胞质蛋白和线粒体蛋白。该方法先将完整的有活性的线粒
体和胞质蛋白分离，再处理后获得高纯度的有活性胞质蛋白和变性的线粒体蛋白，不需要超速度离心，方法简单，
可靠，快速。可用于 1D，2D 电泳，Western Blot，Elisa 等蛋白质实验。提取的完整线粒体也可以经过活性溶解液
处理，再用于免疫共沉淀，凋亡，细胞信号传导，能量代谢等生理学研究，或进行线粒体 DNA 提取，用于基因组学
后续研究。本试剂盒可以每次从1×107个培养细胞或200mg 组织中提取所需要的蛋白质，可以使用50次。
二、产品特点：
1．整个实验过程大约只需要 1 小时左右。
2．可以从50×107个培养细胞或50×200mg 组织中提取所需要的蛋白质或活性线粒体。
3．提取的活性线粒体可以用于凋亡，细胞信号传导，能量代谢等生理学或线粒体基因组学后续研究。
4．活性线粒体的提取量高，高效线粒体溶解 Buffer 提取的蛋白质，可以用于线粒体蛋白质组学研究。
5．不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。
三、运输和保存条件：
常温下运输，收到后，将线粒体溶解 Buffer，DTT，蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂 -20 度保存，胞质提取 Buffer
2-8 度保存，保质期 1 年。
四、试剂盒组成：能够使用 50 次
胞质提取 Buffer 55mL
线粒体溶解 Buffer 5ml
蛋白酶抑制剂 60μL
磷酸酶抑制剂 300ul
DTT 60μL
五、 操作步骤：
1、收集不少于 1×107
细胞，用冷 PBS （pH7.4）洗涤细胞两次（每次 3000 rpm 离心 5 min）；组织样本（200mg）
尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，于冰上剪碎，再用冷 PBS （pH7.4）洗涤三次。
2、在上述细胞或组织样本中加入 1mL 胞质提取 Buffer（注：使用前，每 mL 胞质提取 Buffer 加入 1μL 蛋白酶抑
制剂,5ul 磷酸酶抑制剂和 1μL DTT），置玻璃匀浆器冰上均质 30～50 次， 置于冰上冷却。均质破碎细胞后应
镜检，细胞破碎率不小于 90％。
注意:也不要过度匀浆,以免线粒体膜破裂, 线粒体基粒和基质外流,使得胞质蛋白和线粒体蛋白的分离变得困
难。
3、将匀浆液转移至冷的离心管中，转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上10～15min,于 4℃, 3000rmp 离心 10 min，
弃沉淀。
注意:沉淀中为未破碎的细胞,细胞核和一些细胞碎片.重复步骤 3 可以进一步去除上清中的残余的细胞核，细
胞碎片等杂质。
4、取上清转移至新冷离心管中，于 4℃, 12000rpm 离心 30 min 以沉淀线粒体，上清转至新管中，为胞浆蛋白，-800
C
冷冻保存。 5、取沉淀，加入 0.1mL 胞质提取 Buffer（注：使用前，每 mL 胞质提取 Buffer 加入 1μL 蛋白酶抑制剂,5ul 磷酸
酶抑制剂和 1μL DTT），涡悬震荡洗涤 30 秒，4℃, 13000rpm 离心 10 min，去上清。
6、在沉淀中加入 0.1mL 的线粒体溶解 Buffer(使用前，每 mL 线粒体溶解 Buffer 加入 1μL 蛋白酶抑制剂, 5ul 磷酸
酶抑制剂和 1μL DTT) 。冰上放置 30 分钟，再涡悬震荡 30 秒，4℃, 13000rpm 离心 10 min，得到的上清即为
线粒体蛋白(为变性蛋白)。用于 SDS-PAGE 电泳。
注意:如果需要完整的有活性的线粒体，请将线粒体沉淀用冷的胞质提取 Buffer 悬浮后 2-80
C 保存.如果用于线
粒体活性蛋白研究,请将线粒体沉淀溶解于 0.1mL 预冷的活性溶解液(20mmol/L Tris-HCl pH 7.5
2mmol/L EGTA, 2mmol/L EDTA,1% Tritonx-100，每 1mL 线粒体活性溶解液加入 1μL 蛋白酶抑制剂和 1
μL DTT) 。冰上放置 100 分钟，再涡悬震荡 30 秒，4℃, 13000rpm 离心 10 min，取上清。
注意：如果要提取的活性线粒体中的 DNA，可以参考其它文献。
六、 注意事项：
1． 所有的试剂及器具均需预冷后使用。以保证蛋白质的完整性和活性。
2． 胞质提取 Buffer 需要进行预冷后，再加入。
3． 一般常规提取的蛋白样品，进行后续试验不需要透析，但如果需要较大量的提取蛋白或后续试验结果不理想，
则需要将提取的蛋白样品进行透析脱盐。
4． 可以使用（BSP090 ）Sephadex 重力型脱盐柱脱盐或将缓冲液替换为实验所需要的目的蛋白质的合适缓冲液。
5． 对于提取的蛋白质可以采用我公司生产的非干扰型蛋白质浓度定量试剂盒（SK3071）对提取样品中的蛋白质进
行定量。
6． 如果用于蛋白质质谱研究，请用请用我公司生产的铜染（BSP017）或锌染（BSP019）或质谱用快速银染试剂盒
(BSP021)对胶上的蛋白质进行染色，这些染色方法对蛋白质没有修饰作用，所以对质谱图没有影响。对于一般的
染色，可以采用无毒型考马氏亮蓝染色液（SK3011）或高灵敏考马氏亮蓝染色液（BSP041）进行染色。
7． 线粒体溶解 Buffer-20 度保存时，若有沉淀析出，可置于30℃水浴中保温 10min，并震荡混匀，待沉淀完全溶
解，冷却至室温后，即可使用。
8． 使用后，请旋紧瓶盖，防止溶液挥发和与空气的物质发生化学反应。
9． 本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果，概不承担责任。
| Tb-3175 | 植物叶绿体膜蛋白提取试剂盒 | 50 assays | 800 |
| Tb-3175A | 植物叶绿体膜蛋白提取试剂盒 | 100 assays | 1,500 |
| Tb-3176 | 线粒体/胞浆蛋白提取试剂盒 | 50 assays | 600 |
| Tb-3176A | 线粒体/胞浆蛋白提取试剂盒 | 100 assays | 1,000 |
| Tb-3177 | 组织线粒体/胞浆蛋白提取试剂盒 | 50 assays | 600 |
| Tb-3177A | 组织线粒体/胞浆蛋白提取试剂盒 | 100 assays | 1,000 |
| Tb-3181 | 总蛋白提取试剂盒（2D电泳用） | 50 assays | 600 |
| Tb-3181A | 总蛋白提取试剂盒（2D电泳用） | 100 assays | 1,000 |
| Tb-3182 | 细菌总蛋白提取试剂盒（2D电泳用） | 50 assays | 600 |
| Tb-3182A | 细菌总蛋白提取试剂盒（2D电泳用） | 100 assays | 1,000 |
| Tb-3183 | 植物总蛋白提取试剂盒（2D电泳用） | 50 assays | 600 |
| Tb-3183A | 植物总蛋白提取试剂盒（2D电泳用） | 100 assays | 1,000 |
| Tb-3184 | 植物质膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用） | 50 assays | 800 |
| Tb-3184A | 植物质膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用） | 100 assays | 1,500 |
| Tb-3185 | 酵母蛋白提取试剂盒（2D电泳用） | 50 assays | 600 |