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生物素连接酶（Biotin Ligase）
产品简介
生物素连接酶（Biotin Ligase, BirA, EC 6.3.4.15）是大肠杆菌BirA基因编码的双功能蛋白质，能识别蛋白质分子的特异序列（BirA Substrate Peptide），使蛋白质生物素化。该酶带有6×His标签，剪切反应完毕后可通过Ni-NTA（产品货号：PAN001）去除。
来源
重组蛋白质（E.coli）
活力单位定义
在30℃，30分钟内，将1 pmol 蛋白质或者多肽（融合BSP序列）生物素化所需要的酶量定义为一个活力单位。
纯度
纯度 > 95%，没有检测到其他蛋白酶活力。
应用
生物素标记融合BSP的蛋白质。
储存条件
冰袋运输；分装保存，避免反复冻融；长期保存-20℃，短期可在4℃保存数星期。
反应体系
| 组分 | 体积(μl) | 终浓度 |
|---|---|---|
| 10X buffer A | 2.5 | 1X |
| 10X buffer B | 2.5 | 1X |
| Biotin Ligase（1kU/μL） | 1.5 | 45 U/μl |
| 蛋白或者多肽底物 (1 nmol) | 18.5 | 40 μM |
30℃，温浴30分钟。
注意事项
- 不同的BSP序列，生物素化反应所需要的时间可能会有不同。
- 反应底物量比较大的时候，可以同时放大反应体系。或者蛋白/多肽的浓度加大一倍，补加2.5ul的D-Biotin。
- 底物浓度低的时候，需要孵育的时间要延长。
- 需要较低的温度孵育时候，反应时间要加长
- 氯化钠（>100mM）,甘油（>5%）,硫酸铵（>50mM）等常用缓冲液成分会抑制酶的活力。所以底物尽量保存在低盐的溶液中。
产品规格
| 货号 | 规格 | 包装规格 | |||
|---|---|---|---|---|---|
| Biotin Ligase | 10X buffer A | 10X buffer B | D-Biotin | ||
| RPE004-100 | 100 kU | 100 μl | 200 μl | 200 μl | 200 μl |
| RPE004-500 | 500 kU | 500 μl | 1 ml | 1 ml | 1 ml |